众所周知，砷被认为是一种致癌物，广泛存在于自然界中，长期接触会对人体造成危害。砷的毒性与其化学形态有关，不同价态、不同形态的砷其毒性差异很大。一般来说，无机砷的毒性远远大于有机砷。
本文参考国家卫生和计划生育委员会发布的《GB 5009.11-2014 食品中无机砷的测定》，通过HPLC-ICPMS联用，采用Hamilton PRP-X-100（250×4.1mm）阴离子色谱柱，用15mmol/L磷酸二氢铵及25mmol/L磷酸二氢铵（pH=8.0）作淋洗液，用梯度洗脱的方式测定了河水样品中的五种砷形态，且加标回收率良好，结果表明，该方法能够快速准确地进行水质样品中的砷形态的分析。
1.仪器简介
HPLC-310E是天瑞仪器自主研发的新一代液相色谱仪，该设备采用微处理器智能控制往复式双栓塞并联泵，具有工作耐压值高、稳定可靠、操作方便等特点。可实现等度洗脱和梯度洗脱两种方式，且具有较高的灵敏度、分离度和可靠性。
ICP-MS 2000E采用进口射频电源，保证仪器可多种模式稳定运行，同时利用先进的等离子体屏蔽技术，极大的提高了仪器的灵敏度。该设备具有检出限低、灵敏度高、分析速度快、维护方便、高耐盐性及高性价比等特点。
HPLC-ICPMS联用仪采用一键式数据采集、精准式谱图定位及强大的软件谱图处理功能，可满足不同的形态测试需求（如图1）。
图1.HPLC-ICPMS联用测砷形态的分析仪
2.测试原理
样品溶液经过前处理，由HPLC进样口进样，经色谱柱分离，通过雾化器雾化后送入高温等离子体中，干燥、原子化、电离，元素离子经接口室进入质谱仪，通过离子透镜系统、质量分析器及检测器，检测器对相应元素离子做出响应（每秒离子计数cps（counts
per second），经软件处理，响应强度和时间组成的峰面积与相应组分离子浓度成正比关系进行定性定量分析。
3.实验部分
3.1实验设备及试剂
液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪（江苏天瑞仪器股份有限公司）；
电子天平（BSA224S，赛多利斯）；
色谱柱（Hamilton PRP-X100，4.1×250mm，10μm）；
超纯水系统（Millipore，电阻率为18.2MΩ·cm）；
氨水（优级纯，上海晶纯试剂有限公司）；
磷酸二氢铵（优级纯，国药集团化学试剂有限公司）；
乙二胺四乙酸二钠（优级纯，阿拉丁化学试剂）
5种砷形态标准溶液（亚砷酸根（GBW08666）、砷酸根（GBW08667）、砷胆碱（GBW08671）、一甲基砷（GBW08668）、二甲基砷（GBW08669），中国计量科学院）；
超声波（KH-500E,昆山禾创）。
3.2样品前处理
河水样品经0.45μm的水系滤膜直接过滤。
3.3流动相及砷形态标准溶液配制
15mmol/L
NH4H2PO4溶液：准确称取1.726g磷酸二氢铵，溶于1000 mL超纯水中，经0.45μm的水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30min。
25mmol/L
NH4H2PO4溶液：准确称取2.876g磷酸二氢铵，溶于1000 mL超纯水中，用氨水调节PH至8.0，经0.45μm的水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30min。
20mmol/L
EDTA-2Na溶液：准确称取0.745g乙二胺四乙酸二钠，加入少量超纯水，于150℃的电热板上加热至乙二胺四乙酸二钠完全溶解，冷却后定容至100 mL的容量瓶中以待备用。
砷形态标准溶液：
5种砷标准溶液采用20mmol/L EDTA-2Na按照梯度浓度的方式依次被稀释为0.5µg/L、1.0µg/L、2.0µg/L、5.0µg/L、10.0µg/L、20.0µg/L 混合标准溶液，同时配制五种砷形态的5µg/L的单标溶液以此来判别每种砷形态出峰时间。
3.4实验条件
3.4.1色谱条件
色谱条件详见表1和表2。
表1. HPLC分析条件
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参数
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参数设定
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色谱柱
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Hamilton PRP-X100，10μm，250×4.1mm。
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流动相
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A-15mmol/L
NH4H2PO4；B-25mmol/L
NH4H2PO4（pH=8.0）。
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流 速
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A-1.0mL/min；B-1.5mL/min。
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柱 温
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25℃
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进样量
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100μL
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洗脱程序
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梯度洗脱
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表2. 梯度洗脱条件
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时间
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流动相A
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流动相B
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流 速
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0min
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100%
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0%
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1.0mL/min
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5min
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100%
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0%
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1.0mL/min
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5.01min
|
0%
|
100%
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1.5mL/min
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12min
|
0%
|
100%
|
1.5mL/min
|
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12.01min
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100%
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0%
|
1.0mL/min
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3.4.2质谱条件
ICP-MS分析条件见表3。
表3.
ICP-MS分析条件
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参数
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参数设定
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参数
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参数设定
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功 率
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1300W
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等离子气
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13L/min
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辅助气
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1.06L/min
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载 气
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1.2L/min
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采样深度
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16
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分析模式
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标准模式
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3.5实验结果
3.5.1色谱分离图
按表2的洗脱条件，进样20.0µg/L砷形态混合标准溶液，得到五种砷分离色谱图，如图2。AsC、As3+、DMA、MMA、As5+相对保留时间分别为120s、155s、247s、329s、583s，总分离时间约为600s。
图2. 5种砷形态的混合标准溶液色谱图
3.5.2标准曲线
按照混合标准溶液浓度0.5µg/L、1.0µg/L、2.0µg/L、5.0µg/L、10.0µg/L、20.0µg/L进样得到色谱图，计算其峰面积，以浓度和峰面积绘制标准曲线，线性相关系数均大于0.999，结果详见图3-1~3-5。
图3-3.DMA标准曲线 图3-4.MMA标准曲线
3.5.3 检出限
图4为5.0µg/L混和标准溶液色谱图，以各形态峰附近基线处的3倍信噪比（S/N)峰高对应的浓度作为检出限，AsC、As3+、DMA、MMA、As5+分别为0.078µg/L、0.10µg/L、0.11µg/L、0.13µg/L、0.16µg/L。
图4. 5.0µg/L五种砷形态的混合标准溶液色谱图
3.5.4 测试结果
河水样品及加标1µg/L的测试结果详见表4，样品及加标后砷形态叠加谱图如图5所示。
表4 样品中各砷形态的测试结果
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组分名称
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测定结果
（µg/L）
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加标后浓度
（µg/L）
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加标回收率
（%)
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砷胆碱（AsC）
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ND
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0.878
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87.8
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亚砷酸根(As3+）
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0.713
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1.783
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107.0
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二甲基砷（DMA）
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ND
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1.127
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112.7
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一甲基砷（MMA）
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ND
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0.934
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93.4
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砷酸根（As5+)
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5.997
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7.021
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102.4
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图5. 河水样及河水样加标1.0µg/L色谱图
4. 结论
利用LC-ICPMS联用测试河水样品中的五种砷形态，测试结果表明，该方法检出限低、线性相关系数均在0.999以上，样品加标回收率在87.8%-112.7%之间；同时五种砷形态能够在600s内完成分析，且分离度较好，此方法可满足水质样品中砷的形态分析。
5.参考文献
[1] 国家卫生和计划生育委员会发布 GB 5009.11-2014食品安全国家标准 食品中无机砷的测定 液相色谱-原子荧光光谱法，2015。
